本科畢業(yè)論文模板【精華篇】

思而思學網(wǎng)

【摘 要】

目的研究還原型谷胱甘肽對乳鼠心肌細胞缺氧/復氧(A/R)損傷的影響。方法建立心肌細胞A/R損傷模型,隨機分為5組:A組,正常對照組;B組,單純?nèi)毖?復氧(A/R低氧2h,復氧1h)組;C、D、E組為還原型谷胱甘肽處理組,加入還原型谷胱甘肽(GSH)分別使其終濃度為40、80、160mg/L,后A/R。于復氧后測定各組培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)變化及細胞內(nèi)丙二醛(MDA)含量和細胞存活率。結果與正常組相比,單純低氧/復氧組LDH漏出量、MDA水平顯著升高(P<0。01),細胞存活率顯著降低(P<0。01)。與缺氧/復氧組比較,各谷胱甘肽處理組上述變化明顯減輕(P<0。05)。結論還原型谷胱甘肽對乳鼠心肌細胞A/R損傷具有保護作用,并具有濃度依賴性。

【關鍵詞】

還原型谷胱甘肽,心肌細胞,缺氧,復氧

1材料與方法

1。1材料實驗用1~3天的Wistar大鼠乳鼠,山東大學實驗動物中心提供,雌雄不拘;DMEM培養(yǎng)基由愛博公司出品;胎牛血清為美國Gibco公司出品;胰酶為Sigma公司出品;丙二醛(MDA),乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒均購自南京建成生物研究所;還原型谷胱甘肽(古拉定)由LaboratorioFarmaceuticoC。T。S。R。1生產(chǎn)(批號:4027)。

1。2乳鼠心肌細胞培養(yǎng)無菌取出生1~3天大鼠乳鼠心臟,剪碎后用0。25%胰酶消化4~5次,取除第1次以外的上清,用含15%胎牛血清的高糖DMEM中止消化,離心取心肌細胞沉淀,加入培養(yǎng)液,集中混勻制成懸液,應用差速貼壁法分離純化心肌細胞,以5×105/ml的培養(yǎng)密度接種于24孔培養(yǎng)板中,在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),48h后換液。

1。3實驗分組及操作程序試驗分為5組,每組重復8孔,A組為正常對照組(培養(yǎng)板置培養(yǎng)箱中持續(xù)孵育3h結束實驗);B組為單純?nèi)毖?復氧組(A/R缺氧2h,復氧1h):將培養(yǎng)板置于充有99。5%氮氣的缺氧孵育器中37℃密閉培養(yǎng)2h,再以95%氧氣+5%二氧化碳進行復氧1h;C組,D組,E組為古拉定處理組,加入古拉定使其終濃度分別為40、80、160mg/L。各組缺氧前、復氧前均給藥。

1。4實驗檢測指標(1)計數(shù)細胞搏動:在倒置顯微鏡觀察并計數(shù)心肌細胞搏動的頻率及節(jié)律。(2)細胞存活率計數(shù):采用臺盼藍排斥法檢測,各組取少許細胞混懸液,0。4%臺盼藍混勻2min,按白細胞計數(shù)法在光鏡下計數(shù)藍染細胞。臺盼藍攝取率=藍染細胞/(藍染細胞+未藍染細胞)×100%。(3)LDH及MDA活性及含量測定:實驗結束后按試劑盒說明測定。

1。5統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)

2結果

2。1古拉定對缺氧/復氧心肌細胞搏動的影響正常培養(yǎng)對照組心肌細胞搏動相對恒定,節(jié)律規(guī)則;A/R組心肌細胞搏動頻率減慢,搏動幅度減弱,節(jié)律不齊,有部分停搏,與對照組相比,差異有非常顯著性(P<0。01);各古拉定處理組明顯逆轉A/R損傷造成的搏動頻率和節(jié)律異常,與A/R組比較差異有顯著性(P<0。05)。

2。2古拉定對心肌細胞缺氧/復氧損傷LDH及MDA的影響結果表明,A/R心肌損傷是十分明顯的,而古拉定能明顯減輕這種損傷,古拉定處理組各觀察指標均差異有顯著性,因此提示古拉定對于缺氧/復氧心肌細胞損害具有保護作用,且存在量效關系。

3討論

3。1還原型谷胱甘肽對缺氧/復氧心肌細胞損傷的影響大量研究表明,缺血再灌注期間大量氧自由基的產(chǎn)生可造成細胞損傷。氧自由基導致細胞損傷主要環(huán)節(jié)為作用于細胞外基質,使膠原和透明質酸崩解,使膜磷脂結構的多聚不飽和脂肪酸過氧化而直接損傷細胞膜;肌漿網(wǎng)和線粒體崩潰,心肌細胞在缺氧缺糖條件下,ATP產(chǎn)生減少,代謝障礙,代謝產(chǎn)物堆積,使膜穩(wěn)定性降低,溶酶體釋放,導致生物損傷、變性,使LDH釋放在培養(yǎng)基中,同時再給氧時氧自由基增加,細胞膜受攻擊,細胞膜損傷。

細胞內(nèi)LDH進一步增加,故LDH釋放量是觀測缺血再灌注損傷重要指標。脂質過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA),其含量變化可作為評定自由基生成及對膜脂質雙層結構破壞的指標。本實驗從培養(yǎng)的未成熟鼠心肌細胞入手,排除了在體和離體灌注模型中神經(jīng)、體液因素及其他混雜細胞因素的影響,直接利用還原型谷胱甘肽處理培養(yǎng)的未成熟鼠心肌細胞,結果發(fā)現(xiàn)還原型谷胱甘肽各濃度組均可降低缺氧/復氧損傷造成的心肌細胞死亡率,減少細胞內(nèi)LDH漏出,減少細胞內(nèi)MDA生成,且存在量效關系,表明還原型谷胱甘肽對未成熟鼠心肌細胞有保護作用。

3。2還原型谷胱甘肽對缺氧/復氧心肌細胞損傷的保護機制還原型谷胱甘肽(GSH)對清除自由基有重要作用,它是機體內(nèi)一種重要的抗氧化劑,它能有效清除氧化產(chǎn)生的自由基,維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,并在使暴露于氧化環(huán)境的組織免受自由基損害方面起重要作用。GSH在谷胱甘肽過氧化物酶(GSH?PX)的作用下對有機過氧化物(ROOH)和無機過氧化物(H2O2)起重要清除作用,其還可以起維生素C還原劑的作用,使維生素C成為還原型而不斷清除超氧自由基。

近期有研究表明,GSH可維持線粒體內(nèi)膜巰基基團的還原狀態(tài)。當GSH含量下降,內(nèi)源性自由基攻擊線粒體蛋白巰基的可能性增大,一方面使酶活性降低,影響線粒體氧化代謝的3個關鍵酶及電子傳遞鏈中酶的活性,NADH減少,ATP產(chǎn)生減少。另一方面,導致膜蛋白巰基氧化交聯(lián),構型改變,線粒體膜滲透性轉運通道打開,鈣釋放增加,胞漿鈣上升,激活細胞膜PLA2和中性蛋白水解酶(CANP),導致細胞膜的損傷或死亡。本實驗表明補充外源性GSH,對保護細胞膜的功能可能具有重要意義,對臨床各種疾患造成的心肌細胞缺氧/復氧損傷有保護作用。

熱門推薦

最新文章